.RU
Карта сайта

Продолжение таблицы 9 - Учебное пособие для студентов специальностей «Биология»

^

Продолжение таблицы 9


Температура, С

Источник ДНК

M.myсo-ides

E. coli

^ M. lyso-deikticus

Фаг Т2

Митохондрии клеток печени
кролика

Ядра клеток печени
кролика

1

2

3

4

5

6

7

70

1,300

1,260

-

1,380

1,275

1,230

65

1,300

1,250

-

1,360

1,235

1,227

60

1,300

1,225

-

1,340

1,180

1,225

55

1,300

1,180

-

1,300

1,115

1,225

50

1,275

1,125

-

1,250

1,060

1,225

45

1,150

1,075

-

1,200

1,030

1,225

40

1,015

1,030

-

1,150

1,010

1,225

На следующем этапе работы произвели гидролиз образцов ДНК 100 %-ой муравьиной кислотой при 120 С, полученный материал подвергли хроматографии на бумаге, после чего содержимое каждого пятна элюировали 10 мл воды. Далее определили оптическую плотность (А) элюатов при 260 нм. Результаты измерений приведены в табл. 10.
^ Таблица 10

Нуклеотидный состав препаратов ДНК



Основание

Коэффициент молярного
поглоще-
ния1 10-3

Поглощение (А) растворов оснований,
полученных из образцов ДНК

Фага
Т2

E.
coli

M. lyso-deikticus

M. mycoides

Аденин

13,0

1,040

1,300

0,910

1,235

Гуанин

7,2

0,324

0,720

1,300

0,216

Цитозин

5,55

0

0,555

0,999

0,167

Оксиметилцитозин

4,4

0,198

0

0

0

Тимин

7,4

0,592

0,740

0,515

0,704

1 Зависимость молярной концентрации

с

и поглощения

А

для кюветы с длиной оптического пути 1 см можно выразить соотношением

А =с.



Задача

1.

Пользуясь результатами табл. 9, изобразите графически зависимость оптической плотности раствора при 260 нм (ось ординат) от температуры (ось абсцисс) для всех образцов ДНК. Определите величину (Тm). Как изменяется оптическая плотность раствора ДНК при понижении температуры?

Задача 2.

Пользуясь результатами табл. 10, определите концентрацию (в микромолях и процентах) каждого из оснований в имеющихся образцах ДНК.

Задача 3.

Постройте график зависимости температуры плавления (Тт) (ось абсцисс) от процентного содержания Г+Ц-пар (ось ординат) для ДНК бактериофага Т2 и изучаемых бактерий. Используя полученный график, определите содержание Г+Ц пар в ДНК кролика и ДНК митохондрий.

Раздел 2. ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИЙ


^ УЧАСТКОВ ГЕНОМА ПРО- И ЭУКАРИОТ


Вопросы и задачи


1. Известно, что геном хлоропластов намного меньше генома бактерий (например, E. coli). Однако по количеству ДНК хлоропласт значительно превосходит бактериальную клетку. Почему? Ответ подтвердите цифровыми данными.
2. В эксперименте была изолирована хромосомная ДНК, включающая ген ^ А. Одна из двух комплементарных нитей этой молекулы ДНК затем была подвергнута гибридизации с мРНК, содержащей участок, соответствующий гену А. После гибридизации образовалась структура, приведенная на рис. 6.
Р
ис. 6.
Структура молекулы после гибридизации ДНК и мРНК
Стрелками указаны границы гена А. Определите, какими структурами представлены обозначенные цифрами участки. Составьте таблицу по образцу табл. 11 и внесите в нее ответы.
^ Таблица 11

Строение гибридной молекулы



Тип структуры

Номер участка

Гибрид ДНК и РНК



Однонитчатая ДНК



Однонитчатая РНК



Двухнитчатая ДНК



Двухнитчатая РНК



3. Двое мужчин являются потенциальными отцами одного ребенка. Для выяснения отцовства использовали фингерпринт-анализ ДНК. На рис. 7 представлена электрофореграмма ДНК матери, ребенка и двух предполагаемых отцов.

Ответьте на следующие вопросы:
1. Кто является отцом ребенка?
2. Сколько полос на электрофореграмме ДНК сына и предполагаемого отца совпадает? Почему?
3. Имеются ли на электрофореграмме полосы, которые позволяют сомневаться в отцовстве?
4. Известно, что самцы муравьев гаплоидны (n), а самки (матки и рабочие особи) диплоидны (2n). Известно также, что в геноме эукариотических организмов имеется микросателлитная ДНК – короткие тандемные повторы (1–6 нуклеотидов), количество которых является определенным для конкретного организма и составляет аллель микросателлитного локуса. В эксперименте были исследованы микросателлитные фрагменты ДНК 10 рабочих муравьев из одного и того же муравейника, в котором есть только одна матка, и она может спариваться только с самцами из своего муравейника. Два микросателлитных локуса были подвергнуты амплификации с помощью полимеразной цепной реакции. Полученную ДНК затем пометили радиоактивной меткой и произвели электрофорез в полиакриламидном геле.
M P O1 O2

^ Рис. 7. Электрофореграмма ДНК матери (М), ребенка (Р) и предполагаемых отцов (О1 и О2)

После завершения электрофореза гель был помещен на радиоаутографическую пластинку, и те места, где находилась меченая ДНК, засветились. Ниже представлена радиоаутограмма описанного выше эксперимента.

Особи:

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Локус 1:

-

-

-



-

-



-

-

-



-



-

-

-



-

-

-

-

Особи:

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Локус 2:



-

-





-

-

-







-





-

-







-

-



-

-





-

-





-



  1. Сколько аллелей находится в каждом из двух локусов?

  2. Определите по результатам анализа локуса 1, какое минимальное число самцов спаривалось с маткой?

  3. Определите по результатам анализа локуса 2, какое минимальное число самцов спаривалось с маткой?

5. Какие генетические вопросы можно решить, используя следующие объекты: Zea mays, Drosophila melanоgaster, Saccharomyces сerevisiae, Escherichia coli, бактериофаг , прионы?
1. Получить генные мутации.
2. Получить хромосомные мутации.
3. Построить генетическую карту.
4. Изучить мейоз.
5. Изучить митоз.
6. Получить нехромосомные мутации.
7. Использовать Ti-плазмиду Agrobacterium tumefaciens для клонирования генов в данном объекте.
8. Осуществить трансформацию.
9. Изучить регуляцию Lac-оперона.
10. Изучить нуклеотидную последовательность ДНК.
Составьте таблицу по образцу (табл. 14) и внесите в нее ответы. Против наименования объектов укажите соответствующие цифровые обозначения.
^ Таблица 14

Таблица ответов



Объект

Цифровые обозначения

Zea mays



^ Drosophila melanоgaster



Saccharomyces cerevisiae



Escherichia coli



Бактериофаг



Прионы



6. При анализе факта изнасилования был проведен фингерпринт-анализ, где в качестве пробы была взята кровь жертвы (проба ^ 1), семенная жидкость из ее тела (проба 2) и семенная жидкость трех подозреваемых (пробы 3, 4 и 5, соответственно). Результаты Саузерн-блот-гибридизации представлены на рис. 8.

Ответьте на вопросы: 1. 1. Имеется ли среди подозреваемых субъектов настоящий виновник?

2. Могут ли все подозреваемые быть освобождены от ответственности?
7. Предположим, что последовательность SINE у одного организма имеет длину 50 п. н. ДНК этого организма выделили и подвергли рестрикции ферментом, разрезающим ДНК на фрагменты 100 п. н. После этого провели тепловую денатурацию ДНК с последующим медленным охлаждением (quenching). Что можно увидеть при электронном микроскопировании полученных фрагментов?
8.Фингерпринт-анализ VNTR-повторов членов одной семьи дал следующую картину:
1 2 3 4 5

Рис. 8. Фингерпринт-анализ идентификации личности














———



———





———



———





———

———



———

———

———





———





———

———





























———

———





———

———



———

———





———







———

———



———



———

———















1

2

3

4

5

6

^ Рис 9. Фингерпринт-анализ VNTR -повторов членов одной семьи.
Исходя из представленных данных, определите число VNTR-локусов, характер наследования, а также число аллелей в каждом локусе.
9. Предскажите возможные результаты гибридизации in situ (количество участков) на препарате хромосом человека при использовании в качестве пробы:
А. Копии какого-либо гена.
Б. Фрагмента теломерного конца хромосомы.
В. рДНК.
Г. SINE-последовательности.
Д. Сателлитной ДНК.
2014-07-19 18:44
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • © sanaalar.ru
    Образовательные документы для студентов.